1、酸沉堿提法。

　　這是一種傳統(tǒng)的分離提取方法。該法是利用大豆中大多數(shù)蛋白質(zhì)在等電點(diǎn)(pH415) 時沉淀的特性,與其他成分分離,沉淀的蛋白質(zhì)經(jīng)調(diào)節(jié)pH 后溶解,因此稱之為酸沉堿提法。酸沉堿提的缺陷是: 耗酸、耗堿量大,廢水處理費(fèi)用高,產(chǎn)品收率低。該分離提取方法有待改進(jìn)。但目前仍然是工業(yè)化生產(chǎn)的基本方法。

2、膜分離法。

　　根據(jù)大豆蛋白的分子量大小、形狀及膜與大豆蛋白的適應(yīng)性,選擇膜材料和不同截留分子量的膜,對大豆蛋白提取液超濾分離,超濾凈化,使非截留組分排除,達(dá)到符合標(biāo)準(zhǔn)的分離大豆蛋白液,接著將凈化后的大豆蛋白提取液超濾濃縮到所需的濃度后出料,噴霧干燥成粉狀大豆分離蛋白。

3、反膠束萃取分離法。

　　反膠束是表面活性劑在有機(jī)溶劑中形成的一種聚集體,其中表面活性劑的非極性尾在外,與有機(jī)溶劑接觸,極性頭在內(nèi),形成極性核,該核具有包含水溶液和溶解蛋白質(zhì)的能力,因而可以用此含有反膠束的有機(jī)溶劑從水相中萃取蛋白質(zhì)。利用反膠束技術(shù)從全脂豆粉萃取大豆蛋白,可一次萃取50 %左右。大豆蛋白萃取過程非常快,用非擴(kuò)散模型解釋較為合理。

　　該法需要的主要儀器有:自動水分測定儀、氣浴恒溫震蕩器、離心機(jī)、凱氏定氮儀、分析天平、恒溫磁力攪拌器和微量進(jìn)樣棒等。

　　影響反膠束萃取過程的主要因素有表面活性劑的種類及濃度、水相的pH 值、離子強(qiáng)度、溫度等。

　　反膠束萃取技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)是:選擇性高、操作方便、放大容易、萃取劑(反膠束) 相可循環(huán)利用、分離和濃縮同步進(jìn)行。其缺點(diǎn)是:蛋白質(zhì)在現(xiàn)有反膠束體系中穩(wěn)定性不高,導(dǎo)致萃取前后蛋白質(zhì)的活性損失較大,因而制約其工業(yè)化應(yīng)用。

4、反相高效液相色譜法

　　這是對大豆蛋白中7 S 和11 S 球蛋白進(jìn)行快速分離的一種方法。在分離條件為40 ℃、流速1mL/ min 的條件下,9 min 可完成相應(yīng)球蛋白的分離。具體方法為:

　�。�1）試劑與試樣。乙腈(CAN) (HPLC 級) 、三氟乙酸( TFA) (HPLC 級) 、HPLC 級水用于移動相的制備。Tris (三甲基氨基甲烷緩沖劑) 和2 —巰基乙醇(分析級) 用于分離大豆蛋白。大豆蛋白分離樣本可為組織化蛋白、大豆粉、豆奶、強(qiáng)化嬰兒大豆,使用前均測定其蛋白質(zhì)含量。樣品溶于水,然后于注樣前用0122μm 經(jīng)無菌處理的多酚濾紙過濾。全部樣品和標(biāo)樣保存在3 ℃或冰凍條件下,樣品溶液在分析當(dāng)天現(xiàn)配,并保存在冰上備用。

　　11 S 和7 S 大豆球蛋白在0130 % mol/ L Tris -HCl 緩沖液和含有0101 mol/ L 22巰基乙醇條件下,經(jīng)高速離心(10000 r/ min) 分別于各自的等電點(diǎn)(pH614 和pH 418) 析出。

　　（2）高效液相色譜。Hewlett - Packard 1090 II型色譜儀,帶有一個二極管倍增器和HP 9153C 型數(shù)據(jù)檢測系統(tǒng),每次進(jìn)樣20μL 。分離在PLRP - S柱(150 mm ×416mm I. D. ) 中進(jìn)行,柱中填有多聚苯乙烯- 二乙烯苯顆粒( 300 ! , 8 μm) , 柱留時間(117 min) 通過不被吸附的尿嘧啶測定,蛋白質(zhì)通過254 nm 紫外吸光值測定。緩慢流動相A 為011 %三氟乙酸( TFA) 水溶液;快速流動相B 為011 % TFA 乙腈溶液。移動相經(jīng)0145μm 尼龍過濾器過濾,用少量氮?dú)馀艢狻?

　　該法的特點(diǎn)是不能用于區(qū)分7 S 和11 S 大豆蛋白,只適用于大豆蛋白產(chǎn)品的快速定性檢測。

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