建立液相色譜儀檢測方法后，應(yīng)對其進行論證，進行全面論證通常需通過簡略核查方法的專屬性，一方嘉通線性，準(zhǔn)確性，精密度，回收率，靈敏度等而實施。在***終論證方法之前，應(yīng)準(zhǔn)備和檢查書面分析方案，使之清晰，嚴密。實際的論證程序按方法的重要性不同，需時為1天一2周不等。理想的情況是，通過方法論證能找出可能因儀器和操作者的不同而導(dǎo)致的潛在問題。

在日常HPLC分析中，柱間重現(xiàn)性可能是主要問題之一。同種方法在不同批號的色譜柱上可能有不同的結(jié)果，任何意外的結(jié)果都應(yīng)進行研究，以找出其原因，避免在日后的工作中出現(xiàn)同類錯誤，因此建立完善液相色譜儀方法并與之論證尤其重要。
1. 應(yīng)預(yù)備數(shù)據(jù)表明所需方法的性能，
2. 應(yīng)有為其它操作者使用的書面分析步驟，
3. 以一個以上的系統(tǒng)或操作者，用包括期望組分和期望被測物濃度的樣品 系統(tǒng)地論證方法的性能，一方嘉通比較不同時間和不同實驗室之間的實驗數(shù)據(jù)，
4. 應(yīng)得到色譜柱的期望壽命以及柱間重現(xiàn)性的數(shù)據(jù)，
5. 研究不正常的結(jié)果，以糾正潛在的問題，
6. 研究所有影響分離的條件（溫度，流動相組成，pH等），
規(guī)定這些條件的限度，對可能發(fā)生的問題（關(guān)鍵譜峰對分離不足，隨運行時間延長，***末譜峰保留值增加等）提出建議措施。
這些條件的要求適用于滿足精密準(zhǔn)確，穩(wěn)定可靠并可移植轉(zhuǎn)讓的嚴格HPLC標(biāo)準(zhǔn)方法。在其它情況下，可能只要求一次成功的分離或能快速，“粗略”地答復(fù)某一特定問題，此時可部分許多建議，僅明白并知道一個方法建立方案的真實目標(biāo)就足夠了。

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